酵母双杂交筛文库

酵母双杂交体系相比较其他蛋白互作技术有着独特的优势。

①真实：酵母细胞是真核细胞，蛋白质有可能保持天然的折叠状态，类似其在体内生理状态下的情况，相比较其他体外验证方法， 它所验证的蛋白质间相互作用将更接近于体内的真实情况。

②灵敏：双杂交系统的敏感度极高，蛋白质之间结合常数低至1mmol/L 左右的微弱作用都可被检测到。许多微弱或短暂的蛋白质 之间的相互作用可以借助报道基因表达过程中的多级放大效应反映出来。

③效率：在筛选cDNA 文库时，双杂交系统能够简捷地得到编码相互作用蛋白的基因序列，它只需构建质粒而不必准备抗体或纯 化蛋白，省略了其它体外检测蛋白之间相互作用方法所必须的蛋白抽提、纯化等繁琐步骤。

实验流程

①辅助启动子的设计及诱饵载体的构建； ②诱饵质粒的自激活检测； ③文库质粒和诱饵质粒共转酵母感受态细胞； ④文库筛选和3AT优化； ⑤文库筛选结果测序分析； ⑥筛选结果回转验证。 ⑦详细报告的整理和数据发送。

服务特色

1. 严苛的阳性克隆筛选标准，Ⅰ类阳性克隆下游验证阳性率＞80%，Ⅱ类阳性克隆下游验证阳性率＞50%。

2. 无条件免费二次筛选，获得更多关注阳性蛋白。

3. BiFC、GST pull-down等下游实验无缝对接。

技术服务