GST Pull-Down技术服务

GST pull-down是通过以适当标签和目的基因进行融合表达作为诱饵，从非相互作用蛋白的细胞或组织抽提液中钓出与诱饵蛋白相互作用的蛋白的一种技术。因为该方法具有操作比较简单，可避免同位素应用危险等，且融合蛋白具有高通量、高选择性等优点，可在多种表达系统中进行研究（如细菌、果蝇、哺乳动物等），因此在蛋白质功能领域研究中得到广泛应用。

GST pull-down在蛋白质领域中

①主要用于筛选与已知融合蛋白质相互作用的未知蛋白质，及鉴定两个已知蛋白质之间是否存在相互作用两个方面;

②主要用于酵母双杂交得到的蛋白质相互作用的验证。

实验原理

GST pull- down的实验原理就是把要研究的目的蛋白基因亚克隆到带有GST(谷胱甘肽转移酶)基因的原核表达载体中，并在细菌中表达GST融合蛋白(GST-X)。把GST融合蛋白挂到带有GST底物的琼脂糖珠上，然后把另一种含目的蛋白(Y)的溶液加入其中，由于谷胱甘肽琼脂糖球珠能够沉淀GST融合蛋白，如果发生相互作用就会形成GST-X-Y的复合物。这一复合物与琼脂糖珠又结合在一起，被沉淀下来。然后用过量游离的谷胱甘肽洗脱非特异结合的蛋白，经 SDS-PAGE分离后进行下一步的Western blot、放射自显影及蛋白质染色分析来鉴定目的蛋白。

服务内容