酵母单杂交文库筛选

酵母单杂交是在酵母细胞内研究DNA与蛋白质之间的相互作用的一种技术。在DNA与蛋白质相互作用研究中的应用主要体现在以 下几个方面:

①鉴定已知DNA和已知蛋白质之间是否存在相互作用;

②分离结合于目的顺式调控元件或其他短DNA结合位点的新蛋 白质;

③准确定位已经证实的具有相互作用的DNA结合位点和对蛋白质的DNA结合结构域进行分析。

特色

1. 启动子诱饵基因序列的最优设计；

2. 无条件免费二次筛库，获得更多转录因子蛋白；

3. 可提供下游DNA与转录因子的互作验证试验。

原理:

许多真核生物的转录激活因子具有特异结合于顺式作用元件上的DNA结合结构域(DNA—bindingdomain，BD)和发挥基因调控功能的DNA激活结构域转录激活结构域(activationdomain，AD)， 这两个结构域单独作用均不能启动下游报告基因的表达。酵 母单杂交技术就是依据这个原理，通过构建可与转录激活结 构域结合的蛋白，然后与特异的DNA序列相结合，进而启动下游报告基因的表达。

技术特点

1、酵母单杂交技术简单易行，在这个过程中，可直接识别与顺式作用元件结合的蛋白质，也可以直接从文库中筛选到蛋白质的编 码序列，而不需要分离纯化蛋白等操作步骤;

2、酵母是真核生物的模式物种，在其体内进行研究更接近真核生物的基因表达调控情况;

3、利用酵母单杂交技术检测到的与DNA相互作用的蛋白质处于自然构象，避免了体外研究中的不足。

4、市面上已有多种商品化的酵母单杂交体系的试剂盒和相应的cDNA文库，为酵母单杂交体系的使用提供了有利的条件。